基础医学论文
姜孝芳 王典银 袁红星 张帆 (荆州市传染病/胸科医院检验科 434100)
近年来随着人口的流动性增多，艾滋病人、糖尿病人伴发结核，结核病发病率不断升高，结核菌的分离培养目前仍为结核病细菌学检验的重要方法，它不仅为诊断结核病，而且在观察疗效、流行病学的指标及研究抗结核药物作用等方面有重要的意义 (1) 。由于临床上一些不规则用药，影响MTC的生长速度或活力，从而出现了AFB法涂片阳性而分枝杆菌培养阴性（smear positive and culture negative,SPCN ） ,即所谓可见不可育的现象 (1) 。结核杆菌由于体内抗结核药物影响及机体免疫因子作用可诱导产生变异，变异结核杆菌不但结构发生改变，且其因变异部位不同而其形态、结构、生长状况都会发生改变，其结果是部分不能在改良罗氏培养基上生长或生长不良 (1) ，也有些在米氏液体培养基上生长不良或不生长，本室对2006年9月27日到2006年11月28日100例临床标本在改良罗氏培养基和改良米氏培养基（法国梅生物里埃公司分枝杆菌培养瓶MB）上的培养结果进行了分析。
1 材料
1．1标本 本次试验的标本为本院2006年9月27日—2006年11月28日门诊和住院病人标本，培养阳性有人型结核杆菌（MTB）和牛型结核杆菌，也有非结核分枝杆菌（MOTT），培养阳性标本做涂片抗酸染色，抗酸染色找到抗酸杆菌确定为培养阳性。
1．2 培养基
A：改良罗斯氏培养基由本室按《结核病诊断细菌学检验规程》 (2) （中国防痨协会.1995年11月.北京 ） 配制,计量器具均经过荆州市计量局检校,符合实验要求.
B: MB 结核培养基为改良米氏7H9液体培养基由法国生物梅里埃公司产品.
1.3仪器设备 BACT/ALERT R 3D血培养仪、VITEK 32鉴定系统为法国生物梅里埃公司产品。我们对３Ｄ１２０的两个６０瓶位的培养箱进行分配，其中Ａ箱为ＭＢ结核培养箱，Ｂ箱为ＢＣ血培养箱，分配设定是梅里埃公司装机工程师进行系统设置。
１.4 消化液 (2；3) 按《结核病诊断细菌学检验规程》和BACT/ALERT R MP处理系统说明书配制和操作。
1．5 中和抗生素 法国生物梅里埃公司产品。
2 方法
2．1 标本的处理 痰标本按《结核病诊断细菌学检验规程》处理。
2．2 标本的接种 按规程处理好的标本先接种罗氏培养基，剩下的进行综合处理:
A:取0.5ml左右消化好的标本用2N HCl中和至中性红指示剂显示淡红色。
B:消化好的标本在3900转离心沉淀10分钟，弃去上清液，沉渣加0.1M PH6.8的磷酸盐缓冲液0.5ml.
C:平衡到室温的MB培养瓶中先加入0.5ml抗菌素补充液(用1ml注射器无菌手术),后加入A、B中处理好的标本0.5ml.
2.3 标本的培养
A: 罗氏培养基放入隔水电热恒温培养箱培养,设定温度与BACT/ALERT 3D一致为35.5 o C,温度波动为±0.5 o C。于培养第三天、第七天观察结果，以后每周观察。
B:MB培养瓶放入BACT/ALERT 3D MB培养箱中培养，温度设置为35.5 o C,仪器自动报告阴、阳性结果。阳性结果需取培养瓶中的培养液离心沉淀后取沉渣涂片抗酸染色，找到抗酸杆菌可以发出初级报告，根据临床需要对阳标本进行分型鉴定或药敏。
2.4 质量控制 本室采用结核分枝杆菌ATTCC R 27294、堪萨斯分枝杆菌ATCC12478、和偶发分枝杆菌ATCC6841做质控菌株，对本室配制的罗培养基进行检测，以上三株质控菌株均生长良好方可使用，其中一株或一管不生长或生长不良皆不能使用，必需弃去重做。
3 结果
3.1 100例临床标本在二种培养基中的生长长状况
表1 100例临床标本在二种培养基中的生长长状况
───────────────────────────────
L-J培养基
MB培养基 ──────────────── 合计
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